淺談HPV的分型檢測(cè)

【摘要】宮頸癌是婦科最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，它是迄今為止唯一找出治病原因的癌癥。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus HPV）的感染是宮頸癌發(fā)病的必要條件，99.8%的宮頸癌患者中可以檢測(cè)到生殖道HPV病毒的感染。高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌前病變的及宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的主要因素。

【關(guān)鍵詞】人乳頭瘤病毒；宮頸癌；高危型

宮頸癌在女性腫瘤的發(fā)生率位居第二，是女性健康的“第二殺手”。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年新增宮頸癌病例約13.5萬(wàn)。HPV感染在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。因此，HPV的篩查及高危型HPV的檢測(cè)對(duì)降低宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生率十分重要。

一、HPV的結(jié)構(gòu)與分型

 HPV是小環(huán)狀雙鏈DNA病毒，在自然界中以裸核休眠狀態(tài)存在，即便在無(wú)宿主的寒冷條件下HPV也能獨(dú)立存活數(shù)月，是人類(lèi)目前所知道的唯一的病毒宿主。HPV為高特殊種群選擇病毒，具有強(qiáng)烈嗜上皮性、高度組織和宿主特異性，可致人類(lèi)皮膚及黏膜異常增生?；蚪M分為早期區(qū)（E區(qū)）、晚期區(qū)（L區(qū)）和長(zhǎng)調(diào)控區(qū)（LCR）三個(gè)功能區(qū)。

HPV不能通過(guò)免疫學(xué)方法進(jìn)行血清分型，主要通過(guò)HPV L1區(qū)的DNA雜交及酶譜分析的方法，將DNA同源性小于50%的HPV定義為新亞型。目前已經(jīng)確認(rèn)的亞型有100余種，至少有42種能感染人類(lèi)生殖道上皮細(xì)胞。HPV6、11、40、42、43、44、54、61、72和81等型別被認(rèn)為是低危型，與宮頸大部分良性病變有關(guān)；HPV16、18、31、35、39、45、51、52、56、58、59、,68、78和82等型別被認(rèn)為是高危型，與宮頸癌關(guān)系密切。其中HPV16和HPV18型是最常見(jiàn)的高危型HPV。HPV16型多見(jiàn)于宮頸鱗癌，而HPV18型則多見(jiàn)于宮頸腺癌。

二、HPV的感染率和年齡的關(guān)系

HPV感染通常是沒(méi)有癥狀的，它是世界上第一大傳染疾病。全世界每年有約10－15%的新發(fā)病例。HPV的感染因素包括初次性生活的年齡、性伴侶數(shù)、吸煙、長(zhǎng)期口服避孕藥、免疫缺陷和抑制等。年齡是影響HPV感染率最重要的因素之一。HPV感染率隨年齡分布呈V形，感染率最低的年齡組為30-34歲，兩個(gè)高峰分別為20-24歲和40-49歲年齡組。60%以上機(jī)體在6個(gè)月左右能依靠自身免疫機(jī)制逐漸將HPV感染清除；當(dāng)病毒或宿主的基因發(fā)生突變或宿主的防御機(jī)制發(fā)生缺陷時(shí)，則可誘導(dǎo)HPV-DNA片段整合到宿主細(xì)胞的DNA上，使得相應(yīng)基因調(diào)控失調(diào)，30%以上會(huì)發(fā)展成宮頸癌。

三、HPV分型的檢測(cè)方法

過(guò)去，因缺少高靈敏度和特異性的HPV診斷試劑，大約70%的感染者在最初的兩年是無(wú)法檢測(cè)到HPV的。大部分感染了HPV的婦女將會(huì)發(fā)展為輕度宮頸損傷，約15%的HPV感染者將會(huì)在兩年內(nèi)發(fā)展為重度損傷，而重度宮頸損傷極有可能發(fā)展為惡性癌變。

傳統(tǒng)上，宮頸涂片檢測(cè)是群體篩查的常規(guī)手段，屬于細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方法。此方法以觀察作為診斷基礎(chǔ)，受取材、涂片制作質(zhì)量、閱片技術(shù)影響，其準(zhǔn)確率低，假陰性高，重復(fù)性差，漏診率可達(dá)30%。在檢查和篩選HPV的基因型方法中，實(shí)時(shí)熒光PCR法及雜交捕獲法最為常用，但是實(shí)時(shí)熒光PCR法所需要的設(shè)備比較昂貴，且操作繁瑣，不適合于對(duì)子宮頸癌的大規(guī)模篩查。雜交捕獲法試劑盒無(wú)須PCR擴(kuò)增即可檢測(cè)出臨床樣品中的HPV DNA，并且可區(qū)別高危型和低危型兩類(lèi)，但是此類(lèi)試劑盒無(wú)法鑒定出感染HPV的具體基因型。

PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是一種先進(jìn)的基因檢測(cè)技術(shù)，具有高度敏感性、特異性、快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。通過(guò)對(duì)病變組織或可疑部位樣品提取DNA，利用特異引物對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行擴(kuò)增。當(dāng)某種病原微生物含量極少時(shí)，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法難以檢出，但通過(guò)PCR技術(shù)可將DNA片斷擴(kuò)增到百萬(wàn)倍以上，能精確檢測(cè)出病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)，及時(shí)判斷病人最適合使用哪類(lèi)抗病毒藥物，判斷藥物療效如何，有利于各種感染性疾病的病原學(xué)診斷，從而為臨床治療提供可靠的檢驗(yàn)依據(jù)。

我院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室于2016年8月購(gòu)進(jìn)了獲得美國(guó)專(zhuān)利技術(shù)的Hybribio雜交儀和SLAN-96S擴(kuò)增分析儀，正式啟動(dòng)HPV分型檢測(cè)項(xiàng)目，利用熒光PCR方法進(jìn)行21分型和12+2分型檢測(cè)。標(biāo)本為宮頸分泌物（女性）和尿道分泌物（男性）。由于標(biāo)本量較多，檢驗(yàn)科指派三名專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員每天進(jìn)行HPV分型檢測(cè)，為廣大患者提供準(zhǔn)確及時(shí)的檢驗(yàn)服務(wù)，也熱忱歡迎各位的咨詢(xún)和指導(dǎo)。咨詢(xún)電話(huà)：0891-6928269。